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芪参二莲汤对肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶―1及抑制因子的影响

作者:未知

  摘 要:目的 研究不同剂量芪参二莲汤对肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶-1及抑制因子变化的影响。方法 于2017年6月~8月选择90只SD雄性大鼠作为研究对象,按照体质量随机分为6组,每组15只,其中1组为正常组,其余5组均为肝纤维化模型,将其分为模型组、秋水仙碱组以及芪参二莲汤低剂量组(5 g/kg)、中剂量组(10 g/kg)和高剂量组(15 g/kg);各给药组分别给予相应的药物灌胃,正常组、模型组则给予生理盐水灌胃;对比各组大鼠MMP-1和TIMP-1水平以及肝纤维化指标水平。结果 正常组与模型组比较,后者的MMP-1、MMP-1/TIMP-1水平明显降低,而TLISA-1水平则明显升高,差异有统计学意义(P   Key words:Qishenerlian Decoction;Hepatic fibrosis;Matrix metalloproteinase-1;Inhibitory factors
  肝�w维化是体内有害因素的长期刺激使得肝脏内弥漫性细胞外基质(ECM)合成与降解不平衡而导致的一种病理变化。而基质金属蛋白酶类(MMPs)与金属蛋白酶抑制剂(TIMP)则与ECM合成与降解具有具有密切关系。研究证实,通过调节MMPs/TIMPs的平衡,能够有效抑制ECM的合成并促进其降解,故而成为逆转肝纤维化的主要手段[1]。有研究显示,芪参二莲汤具有抗炎、保肝等作用,有助于调节MMPs/TIMPs平衡,进而达到逆转肝纤维化的效果[2]。为进一步探究芪参二莲汤对肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶-1(MMP-1)及抑制因子(TIMP-1)的影响,本次研究选取了90只大鼠进行了实验探究,现将具体内容报道如下。
  1 材料与方法
  1.1动物 于2017年6月~8月,在黑龙江中医药大学实验动物中心选取90只SD雄性大鼠(动物合格证号[黑动字第]P00102005)作为研究对象,月龄2个月,体质量180~200 g,平均体质量(192.32±21.01)g;饲养于18~25 ℃室温、50%~60%相对湿度的环境中。
  1.2药物与试剂 药物:芪参二莲汤:黄芪、虎杖、半边莲、茵陈蒿、半枝莲、西洋参、石见穿、猫爪草各10 g,女贞子、五味子、墨旱莲、甘草各15 g组成药方,由煎药室制备并浓缩;硫代乙酰胺(TAA)由上海麦克林生化科技有限公司提供,产品批号MFCD00008070;秋水仙碱片(云南植物药业有限公司,国药准字H53020166,0.5 mg/片)使用前将其研磨成细粉过100目筛,并用蒸馏水配比成混悬液。试剂:大鼠MMP-1和TIMP-1试剂盒(ELISA)。
  1.3分组、造模和给药 在对大鼠进行适应性饲养7d后,按照体质量进行随机分组,总共分为6组,每组15只,分别为正常组、模型组、秋水仙碱组、芪参二莲汤低剂量组(5 g/kg)、中剂量组(10 g/kg)和高剂量组(15 g/kg);其中正常组大鼠行常规饲养,其余各组则采用硫代乙酰胺(TAA)灌胃法造肝纤维化模型,每2 d 1次,共持续7周。而后进行对照观察,给药组灌胃给药剂量为:秋水仙碱0.105 g/kg,低剂量芪参二莲汤5 g/kg,中等剂量芪参二莲汤10 g/kg,高剂量芪参二莲汤15 g/kg,而正常组与模型组则分别给予等量生理盐水对大鼠进行灌胃;给药体积均为8ml/kg,1次/d,连续给药35 d。
  1.4标本制备 于给药35 d后,采用3%的戊巴比妥钠1 ml/100 g对所有大鼠进行腹腔注射麻醉,而后行静脉取血,静置后采用5000 r/min的离心机进行离心分离7 min,取血清并置于-20 ℃的冰箱中保存备用;同时与大鼠肝左叶距边缘约5 mm处取2块规格为10 mm×10 mm×5 mm的组织块。
  1.5指标检测 MMP-1和TIMP-1检测:运用ELISA试剂盒与酶标仪对大鼠血清中的MMP-1和TIMP-1含量进行检测;运用96孔板,分别设置标准孔、空白孔、模型孔、秋水仙碱孔以及芪参二莲汤各剂量孔,在加入标准品50 μl以预计浓度梯度,将10 μl的待测样本分别加入相对应的孔中,并加入40 μl的样本稀释液进行稀释,在进行3次的洗板后加入酶标工作液,并按顺序在每个孔中加入A液50 μl显色剂,后加入B液50 μl显色剂,将其置于37℃的恒温箱内显色15 min,最后用酶标仪进行检测。
  1.6统计学方法 采用SPSS 20.0进行数据分析,计量资料采用(x±s)表示,组间比较行t检验,计数资料则以[n(%)]表示,行?字2检验,P

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